福和三合会成员丁 (由谢天华饰演) 和总区反黑组高级督察段 (由周柏豪饰演) 都是敌对党派安插的卧底。十年之内，丁在组织内步步高升，但他内心深处厌倦了卧底警察这份没有前途的工作。而段 — — 即将成为史上最年轻的总督察，希望从头开始，摆脱不光彩的过去，开启人生新篇章。他计划扳倒他的暗中老板 — — 非法东方贸易公司的宋 (由陈启贤饰演) — — 当福和和东方贸易联手进行毒品交易时，两人并不知道这实际上是主谋们为揭露卧底身份而设的陷阱。两人早就该得到和平与正义，但迈向和平与正义的一步可能会带来致命的后果。
弗洛莉亚是一位敬业的护士，她以坚定不移的奉献精神，在外科病房里应对着节奏紧凑的工作，即使在人手不足的情况下，她仍然将人性和温暖融入到对患者的护理中。随着一天的紧张进行，《夜班》变成了一场扣人心弦的时间赛跑，最终达到扣人心弦的高潮。
